Метод високоефективної рідинної хроматографії

ВЕРХ – метод, що має такі переваги, як висока селективність, відтворюваність і низькі межі виявлення.

ВЕРХ – один із найпоширеніших методів визначення вітамінів у напоях. Вибір системи та виду детектування залежить від концентрацій вітамінів у матрицях. Складність проведення аналізу вітамінів в комбікормах полягає в різниці умов хроматографування для водо- й жиророзчинних вітамінів.

Водорозчинні вітаміни (група В, С та інші) визначаються із використанням оберненої фази, а жиророзчинні вітаміни (К, Е, Д, А) – прямої фази. Це означає, що в аналізі водорозчинних вітамінів використовують одну рухому фазу з низьким вмістом органічних розчинників, а жиророзчинні вітаміни визначають із використанням рухомих фаз органічних розчинників. Тому за потреби аналізу обох груп вітамінів на одному приладі необхідно враховувати час на промивання й кондиціонування системи, що прямо пропорційно впливає на пропускну здатність аналізу.

Визначення вітамінів у напоях регулюється такими нормативними документами (короткий перелік):

ДСТУ 4940:2008	«Продукти перероблення фруктів та овочів. Метод визначення вітаміну А»
ДСТУ EN 14663:2022 (EN 14663:2005, IDT)	«Харчові продукти. Визначення вітаміну В6 (зокрема глікозильовані форми) методом HPLC»
ДСТУ EN 14122:2022 (EN 14122:2014, IDT)	«Харчові продукти. Визначення вітаміну В1 методом високоефективної рідинної хроматографії»
ДСТУ EN 12822:2022 (EN 12822:2014, IDT)	«Харчові продукти. Визначення вітаміну Е методом високоефективної рідинної хроматографії. Вимірювання α-, β-, γ- та δ-токоферолу»
ДСТУ EN 12821:2022 (EN 12821:2009, IDT)	«Харчові продукти. Визначення вітаміну D методом високоефективної рідинної хроматографії. Вимірювання холекальциферолу (D3) або ергокальциферолу (D2)»

Необхідне обладнання

Метод високоефективної рідинної хроматографії

Високоефективний рідинний хроматограф AZURA, KNAUER

Хроматограф AZURA є базовою та бюджетною системою ВЕРХ в лінійці аналітичних приладів від компанії KNAUER. З максимальним тиском до 1000 бар, це надійна система, застосовна для широкого кола стандартних задач.

Систему можна модернізувати в будь-який час за допомогою додаткових модулів AZURA.

ВЕРХ-хроматограф AZURA Compact базується на багатофункціональному модулі Assistant ASM 2.1L.

Цей модуль об’єднує в собі три елементи, формуючи функціональний і компактний пристрій, наприклад:

Дегазатор елюенту для рівневої базової лінії
Прецизійний насос із низьким рівнем пульсації
Рефрактометричного детектора (RID) для визначення вуглеводів або УФ-детектора для визначення підсолоджувачів

Система управляється за допомогою програмного забезпечення ClarityChrom і OpenLAB. Також її можна встановлювати на планшетні комп’ютери.

Технічні характеристики

Діапазон тиску системи	Макс. 862 бар на швидкості потоку до 2 мл/хв; 400 бар на швидкості до 10 мл/хв
Діапазон швидкості потоку	0,001–10 мл/хв
Рекомендована безперервна швидкість потоку	До 5 мл/хв
Доступні насосні системи	Ізократична (Isocratic) / бінарна (Binary HPG) / чотирикомпонентна (Quaternary LPG)
Біологічна сумісність	Опційно доступна для роботи за тиску системи до 400 бар
Варіанти інжектування	Автосамплер, рідинний обробник, ручне, автоматизоване через електричний інжекційний клапан
Діапазон об’єму введення	0,1–5000 мкл залежно від петлі зразка
Місткість зразків	108 стандартних віал ВЕРХ (1,5 мл) або до 768 позицій із використанням мікропланшетів для мікротитрування; з рідинним модулем – до 390 флаконів ВЕРХ
Діапазон термостатування колонки	5–85 °C
Попереднє нагрівання елюенту	Додатковий картридж для попереднього нагрівання елюенту
Параметри перемикання колонок	Опційне перемикання між 8 колонками
Вибір детекторів	DAD 190–700 нм, DAD 190–1000 нм, RID, UVD, MWD, FLD, ELSD, MS
Вибір програмних пакетів	ClarityChrom® CDS, OpenLAB® CDS EZChrom Edition, Mobile Control, Chromeleon™ 7.2