Стельность коров. Исследования. Метод ИФА

Для ранней диагностики стельности коров голштино-фризской породы использовали метод иммуноферментного анализа фирмы IDEXX, основанный на обнаружении белков, ассоциированных со стельностью. Использование данного теста позволяет достоверно диагностировать беременность на 20–28-й день после осеменения коров.

В современном животноводстве остро стоит проблема воспроизводства молочного стада коров. Это обусловлено многими факторами, в частности ранней выбраковкой животных по причинам низкой молочной продуктивности, гинекологических болезней, болезней дистального отдела конечностей, а также заболеваний молочной железы.

В настоящее время самыми быстрыми и достоверными из лабораторных способов диагностики беременности КРС являются методы иммуноферментного анализа (ИФА). Тесты на их основе позволяют определять маркеры стельности, такие как видонеспецифический гормон прогестерон или гликопротеины, ассоциированные с беременностью, в молоке и/или сыворотке крови уже на 28 сутки после осеменения.

В мировой практике существует большой выбор тест-систем ИФА как для количественного, так и для полуколичественного определения прогестерона в лабораторных условиях, а также их более простые варианты для использования непосредственно в хозяйствах.

Однако существуют определенные проблемы в получении адекватного результата, сопоставимого с реальным физиологическим состоянием осемененной коровы, при использовании наборов ИФА на основе прогестерона. Причиной тому является нарушение функционального состояния яичников КРС различной этиологии, вариации в уровнях прогестерона, а также использование программ стимуляции животных с применением прогестеронсодержащих препаратов.

В связи с этим применение прогестеронового теста ИФА для ранней диагностики стельности требует неоднократного тестирования животного для получения относительно достоверного диагноза.

Известны другие методы определения стельности, в том числе ректальный, УЗИ-диагностика, гормональный (по концентрации прогестерона, эстронсульфата, хорионического гонадотропина) и др., каждый из которых имеет свои достоинства и недостатки.

Новым направлением в ранней диагностике стельности коров методом ИФА является использование тестов, определяющих в качестве маркера гликопротеины, ассоциированные со стельностью. Данные белки начинают продуцироваться с первого дня формирования ранней плаценты, производятся ею в течение всего периода стельности и в лабораторных исследованиях позволяют исключать получение ложноположительных и/или ложноотрицательных результатов.

Различные разновидности тестов ИФА на основе белков, ассоциированных со стельностью, в ряде зарубежных стран конкурируют с наиболее распространенным методом диагностики стельности – ректальным методом, который позволяет установить наличие плода достаточно точно лишь только через 2-3 месяца после осеменения. Раньше этого времени стельность достаточно точно может установить только опытный ветеринарный врач. Следует отметить, что ректальный метод диагностики не является безопасным и может служить механизмом переноса инфекционных заболеваний от коровы к корове.

Более того, наборы ИФА на основе белков стельности производства IDEXX серии Pregnancy Test становятся альтернативой и/или хорошим дополнением метода ранней диагностики стельности с помощью аппарата ультразвукового исследования (УЗИ), т. к. позволяют точно выявлять стельных коров уже на 28 сутки после осеменения с достоверностью получаемых результатов 99,5%.

Однако, оценивая реальное положение дел в скотоводческих хозяйствах с различной производственной интенсивностью, становится очевидным, что далеко не каждое хозяйство может позволить покупку достаточно дорогого аппарата УЗИ.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

Изучить эффективность применения набора ИФА – IDEXX Visual Pregnancy Test при ранней диагностики стельности коров на 20 и 35 сутки после осеменения.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Для ранней диагностики стельности использовали пробы сыворотки крови в количестве 96 образцов, полученные от коров голштино-фризской породы, на 20 сутки (ООО «ЗапСибХлеб-Исеть», ООО «Приисетье», АО «Эвика-Агро») и 35 сутки (СПК «Пушкинское») после их осеменения.

При этом в СПК «Пушкинское» не практикуется применение гормональной стимуляции коров после отела для синхронизации полового цикла.

Коровы, принадлежащие ООО «ЗапСибХлеб-Исеть», по технологическому циклу подвергаются синхронизации половой охоты с использованием классической схемы овсинг.

Все животные после отела в ООО «Приисетье» и АО «Эвика-Агро» для активизации половых циклов проходят гормональную обработку по схеме прессинг и овсинг.

Сыворотки крови тестировали с помощью набора IDEXX Visual Pregnancy Test согласно инструкции по применению от производителя, с той лишь разницей, что в хозяйствах, в которых используется синхронизация половой охоты, отбор проб крови проводили уже на 20 сутки после осеменения коров.

Дополнительно контроль беременности всех обследованных коров в хозяйствах осуществляли методом УЗИ на 35 сутки после их осеменения вне зависимости от результатов ИФА.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ОБСУЖДЕНИЕ

Тестирование сывороток крови набором IDEXX Visual Pregnancy Test в СПК «Пушкинское» показало, что из 25 голов КРС, взятых в опыт, в числе которых согласно протоколу исследования УЗИ 11 голов были стельными и 14 коров нестельными, беременными оказались 13 голов коров и 12 голов — небеременными. При этом по результатам теста ИФА 2 головы, давшие отрицательный результат в УЗИ, и 1 голова, показавшая положительный результат в УЗИ, показали наличие у них стельности и ее отсутствие, соответственно.

Портовое обследование этих сомнительных животных на 45 сутки стельности методом УЗИ подтвердило правильность результатов, полученных путем тестирования сывороток крови набором IDEXX Visual Pregnancy Test.

Вероятнее всего данное разночтение в результатах было обусловлено квалификацией специалиста, проводившего УЗИ. Однако при получении подобных результатов УЗИ и с возможной последующей гормональной терапией коров имела бы место стопроцентная вероятность получения двух абортов и удлинение сервис-периода по одной корове с ложноположительной стельностью по результатам УЗИ.

Последующие исследования проводились в хозяйствах, где активно используется гормональная синхронизация половой охоты у коров.

Так, исследование 25 проб сывороток крови коров в ООО «Приисетье» методом ИФА, определяющим гликопротеины, ассоциированные со стельностью, свидетельствовало о наличие таковой у 13 голов. Остальные 12 голов оказались нестельными, что полностью согласуется с результатами УЗИ, проведенным на 35 сутки после осеменения. В ООО "ЗапСибХлеб-Исеть" из 25 обследованных голов методом ИФА 16 голов коров дали положительный результат, а 8 голов – отрицательный. Также 1 голова показала слабое окрашивание раствора в лунке, что поставило под сомнение ее стельность.

На 35 сутки была проведена диагностика методом УЗИ, которая подтвердила в 100% случаев ранее полученные положительные и отрицательные результаты в ИФА.

При этом у коровы с сомнительным результатом на стельность в ИФА (слабое голубое окрашивание раствора в лунке) по результатам УЗИ было обнаружено наличие слабо развитого плодного пузыря, что говорило о стельности этой коровы. Последующее ректальное исследование этой головы на 60 сутки после осеменения показало, что у коровы все же происходит развитие плода, но с выраженной задержкой.

Анализ заведомо отрицательных по стельности сывороток крови, проведенный в АО «Эвика-Агро» с помощью набора IDEXX Visual Pregnancy Test, продемонстрировал абсолютную специфичность данного теста, т. е. все заведомо нестельные животные дали отрицательный результат.

Из 14 опытных коров в этом предприятии 8 голов показали наличие плода и 6 голов оказались нестельными. Последующее исследование этих опытных животных методом УЗИ на предмет стельности на 35 сутки после осеменения показало 100 % чувствительность анализируемого метода ИФА, т. е. подтвердило ранее полученные в ИФА IDEXX результаты исследования.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

IDEXX Visual Pregnancy Test как метод ИФА-диагностики стельности животных можно применять в хозяйствах для раннего определения наличия плода у коров. В данных опытах была продемонстрирована возможность выявления нестельных и стельных животных по сыворотке крови, начиная с 20 суток после осеменения животных. Данный метод диагностики является безопасным для коров, так как не происходит механического вмешательства, беспокойства, возможной передачи инфекции и травмирования плодного пузыря в матке животного.

Метод диагностики стельности с помощью теста IDEXX Visual Pregnancy Test можно применять непосредственно в хозяйствах, так как он не требует специальных лабораторных условий, какого-либо дополнительного оборудования и персонала и включает в состав набора все компоненты, необходимые для проведения тестов.

Такой метод исследования животных на стельность можно практиковать в хозяйствах, где используются программы прессинг и/или овсинг, а также в хозяйствах, не использующих программы синхронизации половой охоты.

Ранняя диагностика стельности коров вышеуказанным тестом позволяет сократить срок сервис-периода и раньше приступить к лечению животных с нарушениями репродуктивной функции, а также выявлять внутриутробную гибель эмбрионов и плодов на ранних сроках беременности.

Необходимо также обратить внимание на рекомендацию компании-производителя – проводить исследование животных, начиная с 28-го дня после осеменения.

ЛИТЕРАТУРА:

Сковородин Е. Н. Игуменова Н. А. Методы ранней диагностики стельности // Известия Оренбургского государственного аграрного университета. 2011. Т.2. №30. С. 89–91.

Шевелев Н., Матрешина Н., Краснов В. Метод ИФА диагностики бесплодия // Животноводство России. 2008. №1. С. 47–48.

Posthuma-Trumpie G.A., van Amerogen A., Korf J., van Berkel W.J.H. Perspectives for on-site monitoring of progesterone // Tr. Biotechnol. 2009. 27:652 – 660.

Мордашева Э. Б., Берчанский Д. И. Клиника «Айболит», г. Красногорск.

Середин В.А. Биотехнология воспроизводства в скотоводстве: учебное пособие. – Нальчик: ИЦ «Эль-Фа», 2004. – 472 с.

Ранняя диагностика стельности коров с использованием ИФА, Самсонова Ж.В., Осипов А.П., Егоров А.М., Рыбина Т.Н., Киреев Н.В. в журнале Ветеринария № 12, с. 46–48

Posthuma Trumpie G.A., van Amerongen A., Korf J., van Berkel W.J.H. Perspectives for onsite monitoring of progesterone // Tr. Biotechnol. 2009. 27:652 – 660.

Патент EP1141727 A2 (от 20 марта 1998). Early pregnancy diagnosis using pags (pregnancy-associated glycoproteins). The Regents Of The Univ. Of Minnesota.

Шевелев Н., Матрешина Н., Краснов В.Метод ИФА в диагностике бесплодия // Животноводство России. 2008. № 1. С. 47,48.

Laing J.A., Heap R.B. The concentration of progesterone in the milk of cows during the repro ductive cycle // Br. Vet. J. 1971. 127:19–22.

Пащенко Е., Шевцов Ф. Диагностика стельности // Молочное и мясное скотоводство. 2008. № 5. С. 28, 29.

«Петритест» (подложка) для определения БГКП

ИССЛЕДОВАНИЯ БЫЛИ ПРОВЕДЕНЫ:

А. А. Жерносенко, канд. ветеринар. наук, доцент кафедры диагностики, внутренних незаразных болезней, фармакологии, хирургии и акушерства, Омский государственный аграрный университет им. П.А. Столыпина;

А. В. Машнин, канд. ветеринар. наук, региональный представитель компании ООО «ЗИП-И» по Уралу, Сибири и Дальнему Востоку;

К. И. Петров, аспирант кафедры диагностики, внутренних незаразных болезней, фармакологии, хирургии и акушерства, Омский государственный аграрный университет им. П.А. Столыпина;

В. В. Гудков, главный ветеринарный врач СПК «Пушкинское»;

А. В. Плахотин, управляющий молочным комплексом ООО «ЗапСибХлеб-Исеть»;

Ф. А. Федоров, главный ветеринарный врач ООО «ЗапСибХлеб-Исеть»;

А. В. Оленьков, главный ветеринарный врач АО «Эвика-Агро»;

С. А. Оржеховская, главный ветеринарный врач ООО «Приисетье».