Быстрый контроль гигиены с люминометрами Kikkoman

Внимание к методам быстрого контроля гигиены стремительно растет, особенно учитывая внедрение на предприятиях системы НАССР. В статье подробно рассказывается о понятиях АТФ, АДФ и АМФ, на которых основываются такие методы, сравнивается их эффективность и описывается решение от японской компании Kikkoman – давнего партнера ХЛР. Также можете посмотреть видео с записью соответствующего вебинара.

История известного бренда

Kikkoman – японский производитель и давний партнер ХЛР: уже 7 лет мы являемся официальным представителем этого бренда в Украине. В 1917 году компания организовалась как семейный бизнес и начала с производства соевого соуса Kikkoman – сегодня Вы можете встретить его и на полках украинских магазинов. В 1990 году этой компанией был разработан метод АТФ-мониторинга здоровья, а в 1993 году – первый люминометр. Данный прибор, люминометр К-100, работал довольно длительное время, и именно с него началось развитие этого рынка и метода.

• В 2009 году появился PD-20: это довольно устойчивый прибор, и он до сих пор работает у некоторых клиентов, которые покупали его еще в те годы
• После него на смену пришел PD-30: данный прибор производился с 2014 года, в нынешнем году его производство завершено. Собственно, это продолжение PD-20-го, он отличается лишь некоторыми функциями, но в целом это также все еще очень прочный прибор
• В 2019 году вышел новый прибор Smart – более совершенная модель, которая соответствует всем современным требованиям

Все эти приборы являются конкурентными на рынке – как технически, так и по ценовой политике.

Расходные материалы к приборам

В левой части рисунка Вы можете видеть оранжевые свабы. Они определяют аденозинтрифосфат (АТФ) и аденозинмонофосфат (АМФ). А отличаются тем, что одни подходят для поверхности, другие – для жидкости. Свабы для жидкости имеют гребенку.

Зеленые свабы кроме аденозинтрифосфата, аденозинмонофосфата определяют еще и аденозиндифосфат (АДФ). В целом между собой они идентичны оранжевым по своей форме и строению.

Все эти свабы подходят к любым приборам. Зеленые, как и оранжевые, также работают и с поверхностью, и с жидкостью.

Отдельная номенклатура – зонд к свабам. Он представляет собой трос, на конце которого находится тампон или сваб. Зонды бывают разного диаметра и разной длины. Их основная задача – добраться до тех мест, куда нельзя добраться обычным свабом. Например, в трубу или труднодоступное место с извилистыми поворотами.

Метод АТФ, АДФ- и АМФ-анализа

Первое, что стоит отметить, – это то, что Kikkoman является единственным производителем, который способен обнаруживать АТФ, АДФ и АМФ одновременно. Это возможно благодаря запатентованной технологии, которая присуща только Kikkoman. При взаимодействии АТФ, АДФ и АМФ с реагентами, которые находятся в свабе, выделяется свечение. Его и обнаруживает прибор люмитестер от Kikkoman – и переводит в световые единицы, или RLU.

АТФ – это прежде всего источник энергии всех живых организмов, в том числе бактерий и грибов. Поскольку все напитки или еда были когда-то живыми, они содержат в себе АТФ. А если на поверхности имеется любой АТФ – значит, там есть как непосредственно сами микроорганизмы, так и благоприятная среду для их развития.

АДФ и АМФ – это продукт деградации АТФ. Откуда он берется? АДФ и АМФ могут появляться на поверхности в результате воздействия на пищевые остатки любой термической обработки. Это может быть огонь, пар, сухожаровой шкаф или другое. Таким образом АТФ переходит в состояние АДФ и АМФ. Вот почему важно выявлять не только АТФ, но и другие пищевые остатки, которые подверглись какому-либо влиянию.

Мы уже знаем, что активные живые микроорганизмы в большинстве случаев содержат АТФ. А откуда же берутся АДФ и АМФ в этих микроорганизмах? Давайте рассмотрим дезинфекцию.

Если мы применяем дезинфекцию, и дезинфектанты попадают на микроорганизмы – в случае успеха их оболочка будет разрушена и сами микроорганизмы прекратят свою жизнедеятельность. Но от них останутся остатки, которые и будут содержать какое-то количество АДФ и АМФ. Это один случай.

Другой вариант развития событий, когда влияние дезинфектанта было не слишком эффективным. Это может произойти в результате недостаточной концентрации, или если сами микроорганизмы находятся в труднодоступном месте, куда дезинфектант проникает плохо. В таком случае при частичном воздействии на микроорганизмы такого дезинфектанта они могут выжить. Их жизнедеятельность будет затруднена, и они не смогут быстро восстанавливать ее и иметь в своем составе АТФ. В такой ситуации они будут больше состоять из АДФ и возможно даже АМФ – это зависит от того, насколько эффективно с ними работает дезинфектант.

Микроорганизмы также могут находиться под пищевой пленкой, которая довольно часто образуется на оборудовании в результате неправильной дезинфекции. Это возможно даже в случае использования воды для промывания недостаточной температуры. Так вот, если мы недостаточно эффективно проводим дезинфекцию и не находим АТФ, это не говорит о том, что на поверхности нет микроорганизмов. Это говорит о том, что они могут находиться в состоянии АДФ и АМФ. И даже если эти микроорганизмы эффективно уничтожили под влиянием дезинфектанта, очень важно промывать поверхность – для того чтобы не осталось их остатков – благоприятной среды для развития тех микроорганизмов, которые могут попасть после дезинфекции, или которые могли остаться незамеченными во время дезинфекции. Поэтому стоит очень внимательно подходить еще и к анализу воды.

Если применяем чистую воду, изначально необсемененную бактериями, то эффективность дезинфекции будет намного выше, чем если использовать воду, которая уже в своем составе будет содержать какое-то количество микроорганизмов. Чем больше микроорганизмов, тем выше бакобсемененность будет после смывания дезинфектанта. 

Еще один фактор – контроль персонала

Очень важно контролировать персонал время от времени, чтобы, так сказать, держать его в тонусе: ведь часто даже при наличии хорошей чистой воды и хорошей системы дезинфекции, соблюдения методики, если у персонала руки обсеменены, происходит контаминация.

Если подвести итог, можно сказать, что удачной дезинфекцией (или удачным контролем чистоты поверхности) является контроль не только активных микроорганизмов, но и микроорганизмов, находящихся в состоянии анабиоза или на грани жизни и смерти после воздействия дезинфектанта, содержащих большую часть АТФ и АМФ. Но также очень важно контролировать наличие пищевых остатков, которые так или иначе могут оставаться в состоянии АТФ, АДФ и АМФ в зависимости от того, была термическая обработка или нет.

Следует заметить, что даже незначительное влияние кипятком или паром на сырье, находящееся на поверхности, может вызвать частичный переход в состояние АДФ и АМФ. Поэтому задачей люмитестера в первую очередь является выявление на поверхности не только активных живых бактерий и пассивных, но и источников пищи, благодаря которым данные микроорганизмы могут очень быстро развиваться.

Способ контроля гигиены: классика и современность

Знакомый для большинства Приказ №548 (пункт «Действия в случае неудовлетворительных результатов») говорит, что в случае неудовлетворительных результатов контроля гигиены необходимо «Совершенствование гигиены производства и отбора сырья».

• Классическая микробиология – единственный доступный ранее способ контроля гигиены на поверхности, требует времени от одного до двух дней
• Благодаря методу АТМ + АДФ + АМФ сейчас есть возможность делать это в течение 10 секунд, что намного быстрее, эффективнее и позволяет мгновенно осуществлять контроль поверхности до начала производства 

Интерпретация результатов

Метод показывает цифровое значение световых единиц, или же RLU. Как понять, какое это количество колониеобразующих единиц? Для этого есть корреляция. Она основывается на сравнении классического метода и метода люминесценции, или работы с люминометром.

Обычно специалисты лабораторий, которые покупают данные люминометры впервые, поступают так:

• Определяют для себя контрольные точки, на которых они будут использовать этот прибор
• Далее первое количество анализов – это может быть 5 анализов на контрольной точке, а может быть 10, 15, в зависимости от интенсивности производства, интенсивности использования – на этих контрольных точках параллельно берутся смывы для прибора и на микробиологию
• Первое время сравнивают показания прибора и количество колониеобразующих единиц, которые выходят на классической микробиологии. Таким образом, выставляют для себя уровень RLU, при котором на микробиологии, классическом методе, ничего высеваться не будет. И прописывают в своей системе НАССР, что на данной точке допустимой нормой является определенное значение, например, не выше 50 единиц RLU, что соответствует нулю колониеобразующих единиц

Сравнение метода АТФ с методом Kikkoman, который определяет кроме АТФ, еще и АДФ и АМФ

В левой части рисунка Вы видите различные матрицы, с которыми можно работать. Для примера: если на поверхности остаются следы сосиски, то в ней больше преобладает АДФ и АМФ, чем АТФ.

Фиолетовые полоски на диаграмме – это анализ свабов А3, которые определяют АДФ, АМФ и АТФ. Например, очень распространенное – это сыр. Он больше всего в себе содержит АДФ и АМФ в целом, больше, чем АТФ. Поэтому при подборе люминометра стоит учитывать, что Вы хотите выявлять именно любые остатки на поверхности, а не только те, которые находятся в сыром состоянии, – тогда Вам больше подходит метод, который обнаруживает АТФ, АДФ и АМФ.

О том, как добиться эффективного результата в дезинфекции. На правой диаграмме Вы можете видеть несколько линий: зеленая – это выявление АТФ, АДФ и АМФ, красная – это метод только АТФ. Как видите, добиться эффективности дезинфекции с прибором Kikkoman сложнее – потому что он замечает все пищевые остатки и микроорганизмы, которые могут быть на поверхности. Зато, когда Вы уже построили для себя метод дезинфекции и добились хороших результатов, то, что называется, живете спокойнее, потому что у Вас меньше рисков и Вы точно знаете, что на поверхности ничего не осталось.

О том, как интерпретировать результат, читайте на сайте apk.hlr.ua в статье «Чего не могут люминометры?»

Сфера применения метода и прибора

• Молокоперерабатывающая промышленность: в любом месте, где молоко контактирует с технологическим или транспортным оборудованием, – цистернах, молоковозах, молокопроводах, перерабатывающих установках
• Молочные фермы: для контроля молокопроводов, танков и насосных установок
• Пивобезалкогольная промышленность: бродильные резервуары, танки, сепараторы, пастеризаторы, различные разливочные аппараты и др.
• Мясоперерабатывающая промышленность: сепараторы, цех обвалки и жиловки, термические камеры, камеры охлаждения, цех нарезки и упаковки и т.д.
• Сельское хозяйство: инкубаторы, контроль воды при вакцинации капельным методом, контроль воды для КРС, выпойки животных
• Медицина: контроль эндоскопов, поверхностей любого типа
• Фармацевтика: прибор прописан в фармакопее, поэтому удачно и легко внедряется в эту сферу и широко там используется

Хранение и обработка информации на приборах Kikkoman Smart

Smart – более продвинутое устройство:

• Совместим с Windows, Android и iOS
• Подключается как через USB, так и по Bluetooth
• Может подключаться не только к ПК, но и к планшету и телефону
• Имеет облачное хранилище
• Предустановленное ПО к одному прибору может быть источником информации для различных операторов
• Прибор сохраняет информацию не только в ПО – ее можно выгружать в формат Excel, JPEG, CSV 

Доверие пользователей – лучший показатель эффективности бренда

Желтым на рисунке ниже обозначены области, где уже есть пользователи этого метода и этого бренда в Украине. Как видите, референс достаточно велик: клиенты оценили конкурентное предложение, качество, цену прибора и эффективность метода.

Функционал люмитестера от Kikkoman

Что может прибор?

• Контролировать чистоту рук персонала, жидкостей и любых поверхностей
• Выдавать быстрый и точный результат всего за 10 секунд
• Предоставлять возможность учета и анализа результатов

Чего не может прибор?

• Не может контролировать наличие микробиологии непосредственно в самом продукте

Прибор будет очень сильно фонить, и мы не поймем, что именно там видим: бактерии или пищевые остатки, так как концентрация пищи очень высока.

В чем нуждается прибор?

Время от времени прибор надо диагностировать – это нужно делать по требованию НАССР с необходимостью получения акта о диагностике. Вы быстро можете сделать это в сервисном центре «ХИМЛАБОРРЕАКТИВа». А вот ремонт Вам не понадобится – прибор вообще не ломается. 

Пример использования люминометра в системе НАССР

Существует три вида дезинфицирующих средств: кислотные, щелочные и на основе спирта.

Если используем кислотные или щелочные, очень важно понять, что после дезинфекции мы хорошо смыли остатки дезинфицирующих средств: они могут подавлять реагент в самом устройстве – свабе, и мы получим ложноотрицательные результаты. Поэтому для контроля остатка кислотного и щелочного состояния поверхности время от времени целесообразно использовать индикаторные полоски.

Если используете моющее средство на основе спирта, то сначала также целесообразно промывать поверхность: для того чтобы понять, что осталось на ней, а что нет. Ведь если использовать люмитестер сразу после применения спиртосодержащего дезинфектанта и не смывать с поверхности, то увидим возможно даже большие значения: потому что количество АДФ и АМФ, которое будет выделяться из микроорганизмов, будет больше, пищевые остатки, которые были, также будут выделять свои АТФ, АДФ и АМФ, и фон увеличится. Поэтому очень важно после моющих средств на основе спирта все-таки промывать поверхность, чтобы видеть реальную картину. Возможно после дезинфектанта и не останется ни одного микроорганизма, но высокое количество, грубо говоря, пищи для микроорганизмов будет способствовать активному размножению после того, как туда попадет хотя бы один микроорганизм. Используйте воду! 

Быстрые методы идентификации Escherichia coli, Coliform, Listeria и Salmonella

Пользователи люмитестеров часто интересуются также свабами и любыми быстрыми методами для идентификации Escherichia coli, Coliform, Listeria и Salmonella. Мы имеем решение такой задачи – отдельные свабы, которые работают без прибора, от производителя из Англии.

1. Автономный простой тест на основе смыва с поверхности.
2. Очень точен – обнаруживает даже одну колониеобразующую единицу.
3. Изменение цвета указывает на присутствие искомой микробиологии. Если цвет не изменился – значит, поверхность чиста от конкретных микроорганизмов.
4. Раннее выявление микроорганизмов дает время для выполнения корректирующих действий.
5. Организмы останутся жизнеспособными для дальнейшего анализа референтными методами: вы можете взять один миллилитр среды и продолжить дальше работу с классической микробиологией для подсчета колониеобразующих единиц. 

Готовые микробиологические среды Compact Dry

• 16 видов уникальных сухих питательных сред для контроля гигиены и патогенных микроорганизмов
• Яркий цвет колоний благодаря хромогенным субстратам
• Почти не отличаются от классического метода и прекрасно коррелируют с ним
• Маленькие и компактные, стерилизованные, готовы к использованию

Как работать с Compact Dry? Здесь все очень просто. Вы делаете пробоподготовку самого образца или берете смыв. После этого ставите образец на подложку. Далее инкубируете и считываете результат.

Также Compact Dry Вы можете использовать для метода мембранной фильтрации. Чтобы было проще брать смыв с поверхности, для этого метода предусмотрены отдельные свабы с 1 мл буфера.

• Достаете сваб, берете зону смыва 10х10
• Ставите обратно в устройство, закручиваете
• Происходит контаминация – смешивание содержимого тампона с буфером
• После чего откручиваете нижнюю часть, выливаете все в подложку Compact Dry и помещаете в инкубатор
• Завершающий шаг – интерпретация результата

Если у Вас возникли вопросы, обращайтесь к специалистам ХЛР: info@apk.hlr.ua, +380 (67) 218-71-98.