Вимоги до безпеки харчових продуктів постійно посилюються. Це, з-поміж іншого, є причиною популярності тестів гігієнічного моніторингу АТФ серед багатьох підприємств. У даній статті поговоримо про переваги і недоліки цього методу, а також розповімо про нове рішення АЗ, яке таких недоліків позбавлене і виводить санітарну гігієну підприємства в цілому і процеси санації зокрема на якісно новий рівень.
Аденозинтрифосфат (АТФ) – це універсальна молекула енергії, яка міститься у всіх живих організмах. Тести гігієнічного моніторингу ATФ ґрунтуються на її виявленні за допомогою приладу люмінометра: вони прості у використанні й дають моментальний результат з інформацією про рівень санітарної ефективності. У харчовій промисловості такі тести успішно використовуються в якості методу моніторингу забруднення навколишнього середовища, у тому числі харчових залишків і бактерій, а також для виявлення біоплівок, які можуть містити хвороботворні мікроби та алергени.
Проте такий тест не позбавлений і недоліків. Адже він може виявляти і використовувати в якості індикатора санації тільки молекулу АТФ. Проблема полягає в тому, що молекула АТФ може бути нестабільною і швидко деградує на аденозиндифосфату (АДФ) і аденозинмонофосфату (АМФ) (рис. 1). А якщо рівень АТФ в харчових залишках або під біоплівкою деградує, то тести, які здатні виявити рівень тільки цієї молекули, можуть бути недостовірним показником санітарії та давати неправдиві негативні результати. Чи є рішення цієї проблеми?
Рис. 1. Деградація АТФ через АДФ до AMФ
Рішення є! Було визначено, що навіть при зниженні АТФ концентрація загального аденилата (АТФ + АДФ + АМФ) залишається відносно стабільною (рис. 2). Тому тест, який може виявити загальний аденилат (або A3), забезпечить більш високу чутливість - через збільшення виявлених залишків – і з набагато меншою ймовірністю призведе до хибнонегативних результатів.
Рис. 2. Стабільність концентрації загального аденилату при деградації АТФ
Технологія Kikkoman A3 використовує передову хімію ферментів, яка дозволяє виявляти загальний аденилат і значно підвищує чутливість свабу для санітарно-гігієнічного аналізу.
За допомогою двох додаткових ферментативних реакцій AMФ рециркулюють в АТФ із використанням піруват-ортофосфат-дікінази, а АДФ перетворюється в АТФ за допомогою піруваткінази (рис. 3). Це дозволяє тесту виявляти і кількісно визначати загальний аденилат і значно збільшує доступний для тесту сигнал.
Рис. 3. Принцип виявлення A3: інноваційний процес із використанням передової хімії ферментів
Відео «Швидкий контроль гігієни з люмінометрами Kikkoman»
Ефективність методу підтверджена незалежними дослідженнями. Одне з таких досліджень було проведено компанією Food Safety Net Services (Сан-Антоніо, штат Техас): технологія Kikkoman A3 продемонструвала відмінне виявлення ATФ, AДФ і AMФ порівняно з трьома провідними конкурентними продуктами ATФ (три звичайних АТФ-методи не виявили АДФ або АМФ навіть при 10–12 моль).
Рис. 4. Визначення динамічного діапазону АТФ, АДФ і АМФ для LuciPac A3 від Kikkoman
Зокрема, технологія Kikkoman A3 була порівняна з трьома провідними АТФ-тестами на їх здатність виявляти аденозинові нуклеотиди з різних типів харчових матриць. Цільовими продуктами для цього дослідження були яловичина, ковбаса, готова до вживання індичка, морепродукти, яйця, пиво, горіхи, фрукти та овочі. Результати цих тестів наведені на рис. 5.
Рис. 5. Аналіз продуктів та напоїв із використанням технології Kikkoman A3 і трьох наявних у продажу тестів для моніторингу АТФ від провідних компаній. (Конкурент «H2» – це тест, який продається як високочутливий пристрій, і люмінометр)
Багато виробників будуть враховувати рівень RLU як і для звичайного аналізу з типовим критерієм «Пройдено/Не пройдено» після дезінфекції, застосовуваній у власних програмах санітарії. Додатковою перевагою є те, що технологія Kikkoman A3 показує, що в зразках все ще залишається значна кількість залишків продукту. Така інформація вкрай важлива, оскільки дані продукти є поширеними алергенами і будь-які їхні залишки можуть контамінувати вироблений продукт.
У рамках даного дослідження технологія Kikkoman A3 і звичайний метод АТФ також порівнювалися з тестом на білковий мазок. Метод A3 показав значення більше 200 RLU при 105-кратних розведеннях, у той час як метод АТФ показав близько 30 RLU навіть при 102-кратних розведеннях. Таким чином, метод Kikkoman A3 досить чутливий, щоб виявити залишки, які можуть містити алергени арахісу, і чутливість методу Kikkoman A3 перевершує чутливість звичайних тампонів (свабів) на білок.
Деякі види тестів латерального потоку або ІФА на виявлення алергенів, такі як морепродукти і специфічні горіхи, не завжди доступні на ринку. Таким чином, аналіз Kikkoman A3 може бути корисним доповненням до програми санітарії й для аналізу аллергенвмісних залишків, які складно виявити без спеціальних наборів.
Рис. 6. Порівняння меж виявлення для моніторингу АТФ і А3, сваба на білок і методу латерального потоку (LFD) із використанням гомогенізованого і розведеного зразка арахісу
Об’єм зразка А3-, АТФ-аналізу і сваба на білок: 100 мкл
A3 і звичайний метод на АТФ: розрахункова концентрація, еквівалентна 100 RLU
X: Розраховано 10 частин на мільйон (ppm) цільового білка за методом ІФА
X: Розраховано 10 частин на мільйон (ppm) білка (аналіз білка Бредфорда)
Шість поверхонь із нержавіючої сталі піддавалися впливу трьох видів сирого м'яса. Ці поверхні були промиті тричі – перший раз промивалися холодною водою, другий – гарячою, а третій – губкою з мийним засобом і ополіскувачем (рис. 7). Після кожного промивання проводили аналізи АТФ і A3 (LuciPac A3 Surface / люмінометр PD-30).
Результати аналізу із використанням звичайного методу АТФ показані червоними лініями на рис. 7.
Перший і другий етапи промивання холодною і гарячою водою дали результат менше 200 RLU. Це важливо, оскільки багато підприємств із переробки харчових продуктів використовуватимуть 200 RLU в якості типового критерію «Пройдено /Не пройдено».
Таким чином результати показали, що A3 є найкращим методом для досягнення достовірних результатів, у тому числі й для нержавіючої сталі.
Рис. 7. Метод і результати санітарно-гігієнічного моніторингу нержавіючої сталі, підданої впливу сирого м'яса, із використанням методів АТФ і Kikkoman A3
Як бачимо, технологія Kikkoman A3 – це розширений тест, який виявляє загальну кількість аденилатів і є набагато більш чутливим методом для виявлення залишків їжі і алергенів, ніж традиційні аналізи на АТФ. Незалежні дослідження повністю підтвердили ефективність технології Kikkoman A3, а значить, Ви впевнено можете використовувати цей інноваційний аналіз моніторингу гігієни, щоб отримувати швидкі й точні результати та забезпечувати максимальну безпеку Вашої продукції.